Мазок по граму как делать
Мазок по граму как делать
Содержимое заднего свода влагалища для исследования берут браншей пинцета, узким деревянным шпателем или стеклянной пипеткей длиной 20 см, диаметром 5—7 мм с изогнутым дистальным концом и резиновым баллоном на проксимальном конце. Так как особенности влагалищного содержимого могут быть различными в зависимости от длительности пребывания во влагалище и особенностей его моторной функции, рекомендуется за 2 дня до взятия мазка механически очистить влагалище от содержимого и воздерживаться от влагалищных манипуляций и половых сношений. У девственниц содержимое влагалища берут проволочной петлей через ушное или носовое зеркало или с помощью детского вагиноскопа.
Предметные стекла для влагалищных мазков должны быть предварительно обезжирены. Мазок делают с помощью шлифопанного стекла. Он должен быть тонким. При скудном содержимом влагалища насасывают в пипетку до взятия мазка каплю изотонического раствора хлорида натрия и разведенные выделения наносят на стекло. Мазок фиксируют по влажном состоянии в течение 15 мин смесью 96% этилового спирта и диэтилового эфира (1 : 1). Мазок может оставаться в фиксирующем растворе в течение 15 дней.
При подготовке влагалищного мазка для полихромной окраски рН фиксирующего раствора снижают с 6,9—7 до 5,6—6, что способствует большей восприимчивости клеток к ацидофильной окраске. Для этого мазок фиксируют смесью из изопропилового спирта (97,5 части) и ледяной уксусной кислоты (2,5 части).
1. Упрощенный метод окраски. Высушенный на воздухе мазок окрашивают 1 % раствором метиленового синего в течение 2 мин или раствором фуксина (3 г фуксина+96 мл абсолютного спирта) в течение 1 мин. Краску смывают проточной водой и мазок высушивают.
2. Окраска гематоксилин-эозином. Фиксированный в смеси спирта с эфиром мазок окрашивают в течение 15 мин в растворе гематоксилина, смывают краску водой, окрашивают на протяжении 3—5 мин эозином и повторно смывают водой. Для обесцвечивания ядер мазок проводят последовательно через 70% (5 мин), 95% (5 мин) и 100% (8 мин) спирт, высушивают, помещают на 15 мин в ксилол и заключают в канадский бальзам.
3. Полихромная окраска. Применяются три краски — гематоксилин для окрашивания ядер клеток влагалищного эпителия, оранж 0,6 (ацидофильная) и зелень лихтгрюн Lumiere EA-31 (базофильная).
Фиксированный мазок проводят последовательно через 70% и 50% спирт, погружают в дистиллированную воду, окрашивают в течение 5— 10 мин гематоксилином. Промывают в дистиллированной воде, 4—5 раз в 0,5% водном растворе НСl, а затем проточной водой. На 1 мин мазок погружают в карбонат кальция (3 капли насыщенного водного раствора на 100 мл воды) и проводят последовательно через 50%, 70%, 80% и 95% спирт, в течение 3—4 мин окрашивают оранжем, проводят дважды через 95% спирт, погружают на 10—15 мин в краску ЕА-31, затем в 95% и абсолютный спирт и заключают в канадский бальзам.
Ядра влагалищных клеток окрашиваются интенсивно в светло-синие, темно-пурпурные тона, цитоплазма базофильных клеток — в голубовато-зеленоватые тона, цитоплазма ацидофильных клеток — в желтовато-оранжевые, розовато-красные тона.
Влажный фиксированный мазок окрашивают специальным сложным составом из ряда красок в течение 2 мин. Последовательно проводят мазок через 70%, 90% и абсолютный спирт, помещают в ксилол и заключают в канадский бальзам.
Состав краски: а) этилового спирта 100 мл, шарлаха бибиховского 0,5 г, оранжа 0,25 г, зеленой 0,075 г, фосфорно-молибденовой кислоты 0,5 мл, фосфорно-вольфрамовой кислоты 0,5 мл, ледяной уксусной кислоты 1 мл;
б) фосфорно-вольфрамовой кислоты 0,5 мл, фосфорно-молибденовой кислоты 0,5 мл, ледяной уксусной кислоты 1 мл, эритрозина 0,5 г, бриллиантового зеленого 0,075 г, 20% водного раствора анилинового синего 20 мл, 60% спирта 80 мл.
Окраска цитоплазмы и ядер клеток аналогична окраске по методу Паваниколау.
Комбинация приведенных выше методов окраски. Фиксированный мазок на 2—4 мин помещают в приготовленный полихромный протоплазменный краситель, затем последовательно помещают в 75% и 95% спирт и ксилол. Высушивают и заключают в кедровое масло.
Состав краски: оранжа 0,100 г, эритрозина 0,250 г, лихтгрюна 0,200 г, фосфорно-молибденовой кислоты 0,200 г, фосфорно-вольфрамовой кислоты 0,200 г, ледяной уксусной кислоты 1 г, 50% спирта 100 мл. Для приготовления краски 50% спирт разделяют на три равные части, в каждой из них растворяют отдельно оранж, лихтгрюн и эритрозин. После полного растворения каждой краски все смешивают и добавляют остальные реактивы.
Цитоплазма базофильных клеток окрашивается в светло-зеленые тона, ацидофильных — в золотисто-розовые.
Для лучшего прокрашивания ядер способ окраски несколько видоизменяют. Фиксированный мазок окрашивают гематоксилином в течение 1 мин, промывают проточной водой, после чего в течение 2—4 мин окрашивают описанным выше способом полихромным красителем.
Фиксированный одним из описанных выше способов мазок промывают в течение 2 мин в дистиллированной воде, окрашивают в течение 1—3 мин гематоксилином, промывают в течение 4—10 мин проточной водой, на 2 мин помещают в смесь из 70% изопропилового спирта с 2,5% уксусной кислоты; окрашивают по второму способу, промывают и снова помещают на 2 мин в смесь изопропилового спирта с уксусной кислотой (2,5%), на 2 мин в изопропиловый спирт, на 2 мин в ксилол и заключают в канадский бальзам.
Бактериоскопическое исследование окрашенного мазка ( по Граму)
Где проводится: Во всех медицинских центрах и лабораториях «Тонус»
Срок выполнения: 1-2 рабочих дня
Бактериоскопия (Бактериоскопическое исследование окрашенного мазка по Граму) – это метод, в основе которого лежит исследование бактерий под микроскопом. Это быстрый метод диагностики, который широко используется врачами разных специальностей при подозрении на наличие бактериального инфекционного процесса.
Важно понимать, что бактериоскопическое исследование окрашенного мазка по Граму является не совсем специфичным методом, и для полноценной идентификации возбудителя, а также, определения его чувствительности к антибиотикам, необходимо проведение бактериального посева.
Бактериоскопия широко используется как в терапии, так и в акушерско-гинекологической практике.
В зависимости от типа, бактерии можно разделить на Грам положительные и Грам отрицательные. Есть ряд бактерий, которые не имеют специфической окраски по Граму. В зависимости от расположения в организме (заселения тех или иных слизистых оболочек и органов), спектр бактерий меняется.
Например, при исследовании гинекологических мазков, нормальной флорой являются грамположительные палочки (лактоморфотипы). При возникновении инфекционного процесса, данный тип бактерий, как правило, угнетается и активизируетс рост условно-патогенной и патогенной микрофлоры. При бактериальном вагинозе, как правило, имеет место коккобацилярная грамвариабельная микрофлоры. При гонорее в мазке будут присутствовать грамотрицательные кокки бобовидной формы, расположенные парами (по типу «кофейных зерен»). При других гнойных заболеваниях (не отличающихся специфичностью клиники и возбудителя), при микроскопии, в зависимости от этиологии, встречаются как грамположитеьные, так и грамотрицательные палочки. Помимо выявления возбудителя, в мазке учитывается наличие клеток эпителия, количество лейкоцитов, присутствие ключевых клеток.
Если в качестве исследуемого материала используется мокрота, то обычно, в ней находят грамположитеьные кокки, морфологически сходные с пневмококками, либо мелкие неодинаковой формы палочки, грамотрицательные кокки.
В мазке из раны чаще всего встречаются грамположительные кокки.
Таким образом, материалом для бактериоскопического исследования могут быть:
Так как бактериоскопическое исследование не позволяет с высокой точностью определить возбудителя, после него необходимо проведение бактериологического посева содержимого на флору.
Бактериоскопическое исследование окрашенного мазка по Граму позволяет врачу быстро сориентироваться в большом количестве возможных возбудителей и выбрать антибактериальный препарат для стартовой терапии, обладающий таким спектром, чтобы воздействовать на определнную группу бактерий, так как посев на флору требует нескольких дней для получения результата, а начать лечение необходимо непосредственно по факту обращения пациента за помощью.
Условия подготовки к проведению бактериоскопического исследования окрашенного мазка по Граму определяется лечащим врачом и обусловлено тем, в какой области будет производиться забор биологического материала.
Важно проводить исследование до начала антибактериальной терапии.
Показанием к проведению бактериоскопического исследования окрашенного мазка по Граму является наличие инфекционно-воспалительного процесса различной локализации (мочеполовой системы, легких и дыхательных путей, ЛОР-органов, глаз, слизистых оболочек любой локализации, раневых поверхностей и т.д.).
Основной целью данного исследования является выявление бактерий.
По результатам исследования выдается заключение, в котором отражено: наличие или отсутствие бактерий, тип бактерий (грамположительные, грамотрицательные и т.д.), оценка лейкоцитарной реакции (количество лейкоцитов), количественная оценка микрофлоры, другие возможные клеточные изменения.
Микроскопическое исследование нативного мазка с окраской по Граму в Москве
Микроскопию мазка с окраской по Граму проводят при исследовании различных биологических материалов. Анализ относится к бактериоскопическим методам и применяется для диагностики бактериальных инфекций различных органов.
Приём и исследование биоматериала
Когда нужно сдавать анализ Микроскопическое исследование нативного мазка с окраской по Граму?
Подробное описание исследования
Микроскопическое исследование нативного, то есть взятого непосредственно из органа, материала представляет собой один из методов диагностики различных бактериальных инфекций. Для исследования подходит различный биоматериал (например, собранный из зева, раны, носа и пр.). Анализ также называется «бактериоскопический». При его выполнении используется световая микроскопия, благодаря которой специалист оценивает состав биоматерила из различных локализаций.
Большинство бактерий условно делятся на Грам-положительные и Грам-отрицательные. Первые окрашиваются в фиолетовый (синий) цвет, а вторые — в красный (розовый) цвет. Такое разделение обеспечивается за счет клеточной стенки бактерий и её способности накапливать различные красители.
Бактерии — одна из наиболее древних форм жизни на нашей планете, которая представляет собой многочисленную и разнообразную группу. В процессе эволюции часть микроорганизмов, переходя на симбиотические — взаимовыгодные для людей и микробов — взаимоотношения, адаптировалась к существованию в человеческом теле. Совокупность микробных сообществ, разнообразных по своей численности и видовому составу, в различных локализациях тела человека определяет нормальный микробиоценоз нашего организма.
Наше тело заселено колоссальным числом микроорганизмов: бактериями, грибами, вирусами и археями. Они обеспечивают защиту организма от инфекционных заболеваний, участвуют в переваривании пищи и выполняют много других важных функций. Заселение микробов в организм человека происходит с его появлением на свет. Однако состав микрофлоры разных органов не является строго постоянным и может меняться в зависимости от ряда факторов, к которым, например, могут относиться использование антибиотиков, инфекционные заболевания или гормональный дисбаланс.
Микроскопию мазка с окраской по Граму проводят при исследовании различных биологических материалов. Это позволяет ориентировочно судить о составе микрофлоры, ее количественном содержании и наличии патогенных микроорганизмов. Данный метод в ряде случаев помогает выявить микробы, плохо растущие на обычных питательных средах (при выявлении с помощью культурального метода).
Исследование применяется в качестве дополнения к посеву биологического материала при диагностике инфекционно-воспалительных заболеваний различных органов и тканей. Например, исследование материала из уха может потребоваться при воспалительных заболеваниях органа слуха — отитах. Они могут вызываться различными микроорганизмами, в том числе и грибами.
Исследование материала из глаза производится при диагностике различных конъюнктивитов. Микроскопия отделяемого из раны — при её нагноении, из молочных желез — для уточнения происхождения маститов и т.д.
Таким образом, микроскопия нативного мазка с окраской по Граму представляет собой один из базовых лабораторных методов диагностики инфекционных процессов в разных органах. Анализ доступен по цене и широко применяется в клинической практике.
Набор для окраски по Граму
Назначение набора для окраски по Граму
Набор для окраски по Граму предназначен для дифференциальной окраски, исследования структуры клеточной стенки и выявления принадлежности бактерий к грамположительным или к грамотрицательным группам.
Набор для окраски по Граму рассчитан на проведение 500 анализов.
Принцип метода окраски по Граму
Принцип метода окраски по Граму основан на разнице в химическом составе клеточной стенки прокариотических микроорганизмов. Грамположительные микроорганизмы способны удерживать комплекс красителей триметилфенолового ряда с йодом, в то время как грамотрицательные микроорганизмы, имеющие другую химическую структуру клеточной стенки, не обладают способностью удерживать комплекс красителей триметилфенолового ряда с йодом.
Состав набора для окраски по Граму
Приготовление набора для окраски по Граму
Основной фуксин Циля разводят в 10 раз дистиллированной водой перед использованием. Для этого к содержимому флакона с надписью «Основной фуксин Циля» добавляют 22,5 мл дистиллированной воды.
Использование набора для окраски по Граму
Предметное стекло перед исследованием обезжиривают и делают на нем мазки исследуемых культур. Мазки следует делать тонкими, чтобы клетки равномерно распределялись на поверхности стекла и не образовывали скоплений. Препарат высушивают на воздухе, фиксируют над пламенем горелки (спиртовки) и выполняют следующие действия:
Учет и интерпретация результатов, полученных на базе набора для окраски по Граму
ГК «Униконс»
Продвижение и реализация комплексных пищевых добавок, антисептиков и др. продукции.
«Антисептики Септоцил»
Септоцил. Бытовая химия, антисептики.
«Петритест»
Микробиологические экспресс-тесты. Первые результаты уже через 4 часа.
«АльтерСтарт»
Закваски, стартовые культуры. Изготовление любых заквасок для любых целей.
ВНИМАНИЕ: Уважаемые клиенты и дистрибьюторы!
Работа № 6. Окрашивание микроорганизмов по Граму
Для изучения морфологии микроорганизмов используют методы окраски анилиновыми красителями. Один из них — окраска по Граму — позволяет идентифицировать сходные по форме и размерам бактерии, относящиеся к разным видам и родам.
Приборы и посуда: предметные стекла, пипетки.
Материалы и реактивы: исследуемый материал, изотонический раствор хлорида натрия, бульон, кристаллический фиолетовый, раствор Люголя, 96 %-ный этиловый спирт, фуксин.
Порядок выполнения работы
1. Приготовление фиксированного мазка.
Исследуемый материал развести изотоническим раствором хлорида натрия или бульоном. Каплю размазать тонким слоем на предметном стекле на участке диаметром 1 см и высушить.
Мазок зафиксировать в пламени горелки.
2. Окраска микроорганизмов.
Мазок окрасить кристаллическим фиолетовым в течение 1-2 мин, а затем — раствором Люголя в течение 1-2 мин. Все микроорганизмы, находящиеся в мазке, приобретут темно-фиолетовый цвет.
Мазок обработать 96 %-ным этиловым спиртом в течение 0,5-1 мин. Остатки спирта смыть водой.
Под влиянием спирта одни бактерии обесцвечиваются, их называют грамотрицательные, другие сохраняют фиолетовую окраску — грамположительные. Грамотрицательные бактерии окрашиваются фуксином в красный цвет.